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如何正確使用小鼠IL-22 ELISA試劑盒?
更新時間:2025-11-03瀏覽:141次

  如何正確使用小鼠IL-22 ELISA試劑盒?

  ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗)是一種常用的定量檢測技術,用于測定樣本中小鼠IL-22的濃度?。

  試劑盒準備

  在使用前,請將所有試劑盒組分(如標準品、檢測抗體、酶結合物等)從冰箱中取出,在室溫下充分復溫(通常需要2小時)。濃縮洗滌液若有結晶,需水浴加熱至溶解。

  樣本處理

  不同類型的樣本需要不同的處理方法:

  細胞上清?:離心去除細胞碎片,建議添加蛋白酶抑制劑?。

  血清/血漿?:采用肝素、檸檬酸鹽或EDTA抗凝,抽血后30分鐘內(nèi)離心(2000×g,20分鐘)。為消除血小板影響,建議進一步離心(10000×g,10分鐘)。

  組織勻漿?:需通過裂解液充分裂解細胞,離心后取上清。

  實驗操作流程

  典型的ELISA實驗流程如下:

  加樣?:每孔加入100μL標準品或待測樣本,37℃孵育2小時。

  洗滌?:棄去孔內(nèi)液體,用洗滌緩沖液洗滌3次。

  加檢測抗體?:每孔加入100μL生物素化抗體工作液,37℃孵育1小時。

  加酶結合物?:每孔加入100μL鏈霉親和素-HRP工作液,37℃孵育30分鐘。

  顯色?:每孔加入100μL TMB底物,37℃避光孵育15-20分鐘。

  終止與讀數(shù)?:每孔加入50μL終止液,5分鐘內(nèi)在450nm波長測定OD值(建議使用570nm或630nm作為校正波長)。

  結果計算

  通過繪制標準曲線(以標準品濃度為橫坐標,OD值為縱坐標),根據(jù)樣本的OD值計算其IL-22濃度。建議使用專業(yè)軟件(如Origin、ELISACalc等)進行四參數(shù)擬合。

  注意事項

  實驗前建議先進行預實驗,確定樣本的最佳稀釋倍數(shù)。

  所有操作應避免產(chǎn)生氣泡,加樣需連續(xù)完成以減少誤差。

  顯色底物需避光保存,若已變色請勿使用。

  終止液具有腐蝕性,需避免接觸皮膚和眼睛。

  希望這些信息能幫助您順利完成實驗!如果您對某個具體步驟有更深入的疑問,可以隨時提出。

  注:以上僅供參考,不作為實際數(shù)據(jù),實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。

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